1.被滅菌物體含菌量

含菌量越高，需要的滅菌時間越長。因此，用天然原料配制的培養基所需的滅菌時間要比組合培養基所需的長。

天然原料簡單來說，營養成分既復雜又豐富、難以說出其確切化學組成的原料就是天然原料，比如說各種蛋白胨、酵母浸粉、玉米漿等。

培養基中含有這些成分需要較長的滅菌時間，尤其是玉米漿等。

2.滅菌鍋內空氣排除程度

滅菌鍋是靠蒸汽的溫度而不是單純靠壓力來達到滅菌效果的。混有空氣的蒸汽與純蒸汽相比，其壓力與溫度的關系很不相同，因此，使用加壓蒸汽滅菌時，必須先徹底排盡鍋內的空氣。

(1)滅菌鍋上同時裝有壓力表和溫度計；

(2)將待測氣體引入深層冷水中，若只聽到“撲撲”聲而無氣泡冒出，則證明蒸汽中已不含空氣；

(3)滅菌鍋內加入耐熱性的芽孢桿菌，滅菌后取出培養，觀察其是否能生長即可知滅菌溫度是否達到；

(4)加入適當熔點的固體試劑，經滅菌后看其是否熔化等等。

3.滅菌對象的pH

滅菌對象的pH<6.0時，微生物易死亡；pH在6.0~8.0時，微生物不易死亡。

4.滅菌對象的體積

滅菌對象的體積大小因影響熱傳導速率和熱容量，故會明顯影響滅菌效果。在實驗室工作中，在對大容量培養基滅菌時，必須注意相應延長滅菌時間。

這一點要提醒一下，很多朋友在滅培養基的時候往往只注意到培養基的成分而忽略培養基的體積，10mL培養基和5-6L滅菌時間一致，結果只有一個，要么沒滅透要么滅過了。

5.加熱與散熱速度

在加壓滅菌時，一般只注意達到預定壓力后的維持時間。事實上，由于季節的變化，或滅菌物件體積的大小，都會使“上磅”或“下磅”時間出現很大的差別，從而影響培養基成分的破壞程度，進一步影響研究工作的準確性和重復性，故應適當控制。