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在ELISA實(shí)驗(yàn)中，血液樣本的收集至關(guān)重要。需使用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集靜脈血，室溫放置1小時或4℃過夜，使血清析出。隨后，在2-8℃條件下以1000×g離心20分鐘，收集上清液作為血清樣本。若采集血漿，則需使用含抗凝劑的采血管，采集后30分鐘內(nèi)，在4℃條件下以1000×g離心15分鐘，取上清液。此外，還需注意避免溶血和細(xì)菌污染，溶血會釋放具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，細(xì)菌可能含有內(nèi)源性HRP，這些都會影響檢測結(jié)果。處理后的血清或血漿應(yīng)分裝保存于-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融。
ELISA實(shí)驗(yàn)的血液樣本收集與處理是確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵步驟，以下為簡要操作要點(diǎn)：
一、血液樣本收集
采集類型：
（1）血清：用于檢測抗體、抗原等(如無抗凝管采集)。
（2）血漿：需抗凝劑(如EDTA、肝素、檸檬酸鈉)防止凝固，用于特定分子檢測(如細(xì)胞因子)。
注意事項(xiàng)：
（1）無菌操作：避免污染。
（2）采血管選擇：根據(jù)檢測目標(biāo)選擇抗凝劑(避免EDTA干擾某些酶聯(lián)反應(yīng))。
（3）采集量：通常3-5mL，避免溶血或脂血(影響吸光度)。
二、樣本處理
血清制備：
（1）血液靜置30-60分鐘(室溫凝固)。
（2）離心(2000-3000×g，10-15分鐘，4℃或室溫)。
（3）吸取上清(血清)，避免觸碰沉淀或脂層。
血漿制備：
（1）采血后立即輕柔顛倒混勻抗凝劑。
（2）離心(同上條件)分離血漿。
分裝保存：
（1）分裝至無菌EP管(避免反復(fù)凍融)。
（2）短期(24-48小時)：4℃保存。
（3）長期：-20℃(1個月內(nèi))或-80℃(更久)，標(biāo)記日期/樣本信息。
三、關(guān)鍵控制點(diǎn)
（1）避免溶血/脂血：離心后若血清呈紅色或渾濁，可能影響OD值。
（2）及時處理：血液室溫放置≤2小時，否則釋放代謝物干擾結(jié)果。
（3）凍融次數(shù)：≤3次，建議分裝小體積。
