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3M高靈敏度大腸菌群測試片操作以及判讀

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-05-15
3M高靈敏度大腸菌群測試片操作以及判讀
一、高靈敏度大腸菌群測試片 操作方法  
1. 未開封時,冷藏于≤8℃(≤46℉),并在保存期內用完,高溫度時,凝固水可以排除,包裝物最好于室溫啟開。 2. 已開封的,將封口以膠帶封緊。
3. 已啟開的包裝袋不要冷藏并于一個月內使用完。 4. 制備食物樣品稀釋液,稱取或吸取食物樣品,置入適宜的無菌容器內,如均質袋、稀釋瓶、WhirlPak bag或者其他滅菌容器內
5. 加入適量的無菌稀釋液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4調PH7.2) 、0.1%的旦白膠水(ISO方法6887) 、緩沖旦白膠水(ISO方法6579) 、鹽溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸餾水.但不可用含有枸櫞酸鹽、bisulfite or thiosulfate的緩沖液. 因為它能抑止菌生長。

6、攪拌或均質樣品.

樣品的稀釋液調PH6.6-7.2對酸性樣用IN NaOH、堿性樣用INHCI調PH。

7、將測試片置于平坦表面處,揭開上層膜。 8、使用吸管將1ml樣液垂直滴加在測試片的中央處。
9、細心將上層膜緩慢蓋下,避免有氣光泡產生,切勿使上層膜直接落下。 10、使用壓板(平面底朝下)放置在上層膜中央處。
11、輕輕的壓下,使樣液均勻覆蓋于圓形的培養面積上,切勿扭轉壓板。 12、拿起壓板,靜置至少1分鐘以使培養基凝固。
14、可目視及用標準菌落計數器或其它的照明放大鏡計數,并可參考判讀卡計算菌落數。 15、可以分離菌落作進一步鑒定,即掀起上層膜,由培養膠上挑取單個菌落。
13、測試片的透明面朝上,可堆疊至20片。培養時間和溫度因方法而有不同,最通用的認可方法是:
總大腸菌群
AOAC官方方法986.33和989.10(乳/生乳和其它乳制品)
大腸菌群:32℃±1℃培養24±2h
AOAC官方方法991.14(食品類)
大腸菌群:35℃±1℃培養24±2h
NMKL方法(147.1993)
大腸菌群:37℃±1℃培養24±2h
AFNOR認可方法3M 01/2-09/89A和B(除水生貝殼類動物外的所有食品)
大腸菌群:30℃±1℃培養24±2h

耐熱的(糞)大腸菌群
AFNOR認可方法,3M 01/2-09/89C(所有食品) 44℃±1℃培養24±2h。當提高培養溫度時,培養箱應有一定的濕度是需要的。
 
二、高靈敏度大腸菌群計數測試片 判讀方法  
Coliform count = 4? Coliform count = 13
在PetrifilmTM 高靈敏度檢驗測試片上菌落計數相當容易。測試片中的指示劑使革蘭氏陰性菌染成紅色,上層膜能截留大腸菌群產生的氣泡,當大腸菌群大量產酸時,菌落周圍會產生粉紅色的菌暈。所以,計數紅色帶有氣泡的菌落為大腸菌群,菌落周圍的粉紅色菌暈使計數更加方便。
Coliform count = 30
圓圈1, 2和3中的氣泡形狀有所不同。圓圈1中的氣泡和菌落相鄰;圓圈2中的氣泡撐破了菌落,使菌落看似氣泡的“輪廓”;圓圈3中的菌落被3個小氣泡圍住。細菌學手冊上規定,紅色不帶有氣泡的菌落不計作大腸菌群。
Coliform count = 0
注意圖4至圖9中培養基顏色的變化。隨著大腸菌群數和產酸的增加,培養基的顏色由淡桔黃色(圖4)逐漸向明顯的粉紅色(圖9)轉變。同時做陰性對照有助于區分培養基的顏色。
Coliform count = 90
Estimated coliform count = 320
圓形的生長面積約為60 cm2。當菌落數大于150個時,可選擇1個或多個代表性方格來估算菌落數。計算每個方格的平均菌落數后乘以60,即為估算的大腸菌群數。
Estimated coliform count = 840
在接種區邊緣的菌落和氣泡可能較小,且邊緣培養基外觀略有差異,但不會影響菌落的計數。見圖7。
Coliform count = TNTC
在PetrifilmTM高靈敏度檢驗測試片上,當菌落數過多時難以計數,該現象稱為TNTC (Too Numerous To Count) 現象。該現象伴有以下特征:許多小型菌落和氣泡,有時培養基顏色會加深。見圖8。
Coliform count = TNTC
圖9中,測試片上有許多小型菌落,培養基顏色變深,為TNTC現象。
Coliform count = 2
食品顆粒通常呈不規則形狀,且不帶有氣泡。見圓圈1。在測試片上,人為的氣泡可能由于接種不當引起,其形狀不規則,且不帶有紅色菌落。見圓圈2 。
 
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