DNA經(jīng)過(guò)限制性?xún)?nèi)切酶消化和凝膠電泳后，放入堿性溶液中使其變性，將變性后的單鏈DNA從凝膠中按原來(lái)位置和順序用濾紙吸印轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上，然后再與標(biāo)記探針雜交。此方法比較準(zhǔn)確地保持了特異DNA序列在電泳圖譜中的位置，而且能測(cè)定分子量。
　　試劑：變性液：0.5mol/L NaOH, 1.5mol/L NaCl
　　中和液：1mol/l Tris-HCl, 1.5mol/L NaCl pH8.0
　　20×SSC:0.3mol/L檸檬酸鈉，3mol/l NaCl

　　1．電泳　取DNA約5μg加限制性?xún)?nèi)切酶進(jìn)行酶切，電泳鑒定酶切完全后，取酶消化后的DNA點(diǎn)樣于0.8%～1.2%的凝膠上，以0.8～1V/cm電壓電泳過(guò)夜，在溴酚藍(lán)離凝膠前緣0.5cm處停止電泳。將電泳后的凝膠翻轉(zhuǎn)，紫外燈照射10～20min后拍照。
　　2．變性與中和　將電泳后的凝膠放入變性液中25℃振蕩60min。蒸餾水洗膠1min，將凝膠放入中和液中25℃振蕩60min。
　　3．轉(zhuǎn)移　取托盤(pán)一只，放入10×SSC溶液約500～1000ml，托盤(pán)上搭一塊比凝膠稍寬的長(zhǎng)方形玻璃，取一長(zhǎng)方形Wateman paper（濾紙）搭在橋上，兩邊浸入10×SSC溶液中，仔細(xì)去掉玻璃與濾紙之間的氣泡（用玻棒在濾紙上滾動(dòng)）。將凝膠放在濾紙上，去掉凝膠與濾紙之間的氣泡。將硝酸纖維膜放入2×SSC溶液中浸濕后放在凝膠上（如NC膜浸濕不均勻，則考慮更換NC膜，操作時(shí)手切勿觸及NC膜），去掉凝膠與NC膜之間的氣泡。將一張濾紙（長(zhǎng)和寬均比NC膜小1mm）放在NC膜上，仔細(xì)去掉氣泡。將吸水紙切成與濾紙大小，重疊放在濾紙上，再壓一重物約500～1000g。轉(zhuǎn)膜24h，中間更換吸水紙。
　　4．固定　　用2×SSC溶液洗膜5min去掉殘余凝膠，讓膜自然涼干。將凝膠放入EB液中30min，取出在UV燈下觀(guān)察是否有DNA殘余。80℃烤膜2h，然后將膜封入塑料袋進(jìn)行雜交。